蛋白質(zhì)是生命活動的物質(zhì)基礎,也是生物體內(nèi)的功能性大分子。隨著分子生物學、結(jié)構(gòu)生物學、生物制藥行業(yè)等研究的不斷深入,蛋白質(zhì)純化成為近年來越來越熱的研究話題。
蛋白的純化大致分為粗分離階段和精細純化階段兩個階段。粗分離階段主要將目的蛋白和其他細胞成分如RNA、DNA 等分開,常用的方法為硫酸銨沉淀法。
精細純化階段的目的是把目的蛋白與其他大小及理化性質(zhì)接近的蛋白區(qū)分開來,常用的方法有:凝膠過濾層析、離子交換層析、疏水層析、親和層析等。其中,凝膠過濾層析是常見的純化手段之一。
蛋白層析柱是一種根據(jù)分子大小從混合物中分離蛋白質(zhì)的方法。不同蛋白的形狀及分子大小存在差異,在混合物通過含有填充顆粒的凝膠過濾層析柱時,由于各種蛋白的分子大小不同,擴散進入特定大小孔徑顆粒內(nèi)的能力也各異,大的蛋白分子會被先洗脫出來,分子越小,越晚洗脫,從而達到分離蛋白的目的。
凝蛋白層析柱中的填料大多是交聯(lián)的聚糖(如葡聚糖或瓊脂糖)類物質(zhì),在不同的流動相中溶脹變化差異比較大,因此,蛋白層析柱管也不同一般的玻璃柱,柱床長度通??烧{(diào)節(jié),分為一端可調(diào)軸向壓縮和兩端可調(diào)軸向壓縮柱。匯通色譜現(xiàn)推出BSXK夾套式蛋白層析柱和Better Glass系列蛋白層析柱,廣泛應用于蛋白、多肽、抗體、酶、病毒、重組蛋白等生物分子純化。
下面讓我們來了解一下蛋白層析柱的特點有哪些。
1、柱塞設計,柱填裝體積可根據(jù)需要自行調(diào)整,一根柱管就可代替多根固定柱管;
2、人性化設計,操作簡單,清洗方便,易于拆卸組裝;
3、流路多為惰性材料,溶劑耐受性能好;
4、篩板孔徑可自定義,適用于各種規(guī)格填料;
5、無截留死體積,保證內(nèi)部填料分布均勻,重現(xiàn)性好;
6、關鍵部分采用PEEK材質(zhì),生物兼容性好;
7、夾套可維持一定的熱穩(wěn)定操作溫度,針對敏感樣品純化具有冷卻外殼;
8、BSXK空柱管材料為高硼硅玻璃,可以目測到柱床狀態(tài),及時進行色譜柱重新填裝,提高實驗效率;
9、玻璃材質(zhì)使分離過程更加直觀;
10、種類豐富,可根據(jù)要求選定一端可調(diào)軸向壓縮和兩端可調(diào)軸向壓縮柱;
應用范圍
●蛋白純化:用于從復雜混合物中純化出目標蛋白質(zhì),廣泛應用于生物制藥和生物化學研究。
●核酸純化:部分層析技術也可用于純化核酸等其他生物大分子。
操作步驟
●裝柱:選擇適合的層析介質(zhì)裝填入柱,確保介質(zhì)均勻無氣泡。
●平衡:用緩沖液預先平衡層析柱,準備樣品上樣。
●上樣:將準備好的蛋白質(zhì)樣品緩慢加入柱頂,避免擾動床層。
●洗脫:根據(jù)層析類型,采用適當?shù)南疵撘簩⒔Y(jié)合的蛋白質(zhì)按順序從柱中洗脫出來。
●收集:從柱出口收集洗脫液,并進行檢測和分析,以獲得純化后的蛋白質(zhì)
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